PCR擴(kuò)增試劑盒實(shí)驗(yàn)時(shí)的幾大事項(xiàng)說明
瀏覽次數(shù)：1033發(fā)布日期：2020-10-21
PCR擴(kuò)增試劑盒提供DNA擴(kuò)增所需要的基本試劑。DNA擴(kuò)增時(shí)，用戶需要自行準(zhǔn)備模板和擴(kuò)增所需要的引物。高溫嗜熱Pfu DNA聚合酶主要用于對保真度要求非常高的DNA擴(kuò)增，這些擴(kuò)增要求擴(kuò)增的產(chǎn)物中不能出現(xiàn)突變等錯(cuò)誤。
PCR擴(kuò)增試劑盒實(shí)驗(yàn)事項(xiàng)：
1.樣本上PCR平臺可做的樣本包括血液，唾液，口腔拭子，在實(shí)驗(yàn)中，對于DNA投入量要求不是很高，根據(jù)不同項(xiàng)目需求，DNA投入量的范圍在100pg到100ng之間。
2.進(jìn)行PCR反應(yīng)前，可以將所有g(shù)DNA的濃度稀釋到同一濃度，并轉(zhuǎn)移到PCR8聯(lián)管中，一方面是便于排槍操作，另一方面是加入相同起始量的gDNA，這樣可以降低終文庫的濃度差異，便于混合文庫。
3.大多數(shù)情況下引物是1管，操作相當(dāng)方便；當(dāng)目標(biāo)區(qū)域是外顯子或者是其他連續(xù)區(qū)域時(shí)，把引物分裝為2管，需要第二輪PCR前把產(chǎn)物合并，再進(jìn)行下一步反應(yīng)。
4.執(zhí)行多重PCR反應(yīng)時(shí)，特別是樣本量多的情況下，可以將T1設(shè)為一組，T2設(shè)為一組，便于制備反應(yīng)試劑混合液和排槍操作；并把解凍好的試劑放置在冰盒上，在冰盒上進(jìn)行加樣操作。
5.實(shí)驗(yàn)中，可以在PCR管壁上和管蓋上同時(shí)進(jìn)行反應(yīng)編號標(biāo)記，防止高溫或其他原因?qū)е掠浱栂?，避免后續(xù)產(chǎn)物混合操作失誤，造成樣本交叉污染。
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